福彩三d彩神通-选修一常识关键5(完)

第六课时  血红蛋白的提取和别离

1.凝胶色谱法(分配色谱法)原理:分子量大的分子经过多孔凝胶颗粒的空地,旅程短,活动快;分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部,旅程长,活动慢。

作用: 别离蛋白质,测定生物大分子分子量,蛋白质的脱盐等。

2.缓冲溶液作用:抵抗外界酸、碱对溶液pH的搅扰而坚持pH安稳。

3.凝胶电泳法:

(1)原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和巨细不同,在电场中遭到的作用力巨细、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

(2)别离办法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。

3)别离进程:在必定pH下,使蛋白质基团带上正电或负电;参加带负电荷多的SDS,构成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质搬迁速率仅取决于分子巨细。


1.样品处理

 红细胞的洗刷:生理盐水,缓慢拌和10min,低速短时间离心,如此重复洗刷三次。

②血红蛋白的开释   在蒸馏水和甲苯作用下,红细胞决裂开释出血红蛋白。

2.粗别离符艳朵

①别离血红蛋白溶液   试管中的溶液分为4层。第一层为无色通明的甲苯层,第2层为白色薄层固体,是脂溶性物质的沉积层,第3层是赤色通明液体,这是血红蛋白的水溶液,第4层是其他杂质的暗赤色沉积物。

②透析:磷酸缓冲液中透析能够去除样品中分子量福彩三d彩神通-选修一常识关键5(完)较小的杂质,或用于替换样品的缓冲液。

3.纯化  色谱柱

4.为什么凝胶的装填要严密、均匀?假如凝胶装填得不够严密、均匀,就会在色谱柱内构成无效的空地,使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空地中经过,扰乱洗脱液的活动次第,影响别离的作用。

5.参加柠檬酸钠有何意图?为什么要低速、短时离心?为什么要缓慢拌和?

避免血液凝结;避免白细胞沉积;避免红细胞决裂开释出血红蛋白。

6.为何用红细胞进行蛋白质的别离

哺乳动物及人的老练的红细胞是双面凹圆饼状,没有细胞核和细胞器。福彩三d彩神通-选修一常识关键5(完)其含有的血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱别离时能福彩三d彩神通-选修一常识关键5(完)够经过调查色彩来判别什么时候应该搜集脱液。这使血红蛋白的别离进程十分直观,大大简化了试验操作。


 



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